藥品研發(fā)中長期留樣進行穩(wěn)定性試驗的目的和意義

*，穩(wěn)定性試驗包括影響因素試驗、加速試驗和長期留樣試驗。影響因素試驗的目的是明確藥品可能的降解途徑、初步確定藥品的包裝、貯藏條件和加速試驗的條件，同時驗證處方的合理性和分析方法的可行性；加速試驗的目的是明確藥品在偏離正常貯藏條件下的降解情況、確定長期留樣試驗的條件；長期穩(wěn)定性試驗的目的是確認影響因素試驗和加速試驗的結(jié)果，明確藥品穩(wěn)定性的變化情況，確定藥品的有效期；應該說長期留樣試驗是穩(wěn)定性試驗的核心。

但是，藥物研發(fā)是一個系統(tǒng)工程，從研究、開發(fā)到生產(chǎn)上市，要經(jīng)歷許多個階段，包括基礎(chǔ)研究、模型的建立與開發(fā)、臨床前研究、臨床試驗，以及注冊審批與生產(chǎn)上市等階段，藥學研究則要經(jīng)歷由小試、中試到大生產(chǎn)逐級放大的過程，如何認識不同研發(fā)階段不同規(guī)模樣品進行穩(wěn)定性試驗的目的和意義，以及不同規(guī)模樣品穩(wěn)定性試驗結(jié)果對確定或推算產(chǎn)品有效期的價值，是藥品研發(fā)者和評價者應思考的問題。另外，穩(wěn)定性試驗的考察指標主要包括外觀性狀、理化性質(zhì)、化學性質(zhì)和微生物性質(zhì)等方面，那么，這些考察指標變化到什么程度仍被認為是穩(wěn)定的，這個限度是確定藥品有效期的關(guān)鍵。下面就不同規(guī)模樣品進行穩(wěn)定性試驗的目的和意義；如何判斷藥品的外觀性狀、理化性質(zhì)、化學性質(zhì)和微生物性質(zhì)是否發(fā)生變化；如何確定或推算藥品的有效期；以及確定藥品的有效期時需注意的問題等方面談一談自己的看法，與業(yè)內(nèi)人士共同交流和探討。

1 不同規(guī)模樣品進行穩(wěn)定性試驗的目的和意義

在藥物研發(fā)的早期階段，藥學研究還在進行不同處方劑型的比較研究，無法提供不同批次，不同生產(chǎn)規(guī)模樣品的完整的穩(wěn)定性試驗數(shù)據(jù)。小試樣品應進行影響因素試驗、加速試驗和長期留樣的穩(wěn)定性試驗。影響因素試驗考察一批樣品，時間是10天；加速和長期留樣試驗樣品的批次和時間不作硬性規(guī)定，重點關(guān)注加速試驗的結(jié)果，以及與長期留樣試驗結(jié)果的比較，穩(wěn)定性研究結(jié)果應能確保樣品在相應研發(fā)期間質(zhì)量的穩(wěn)定性。

隨著藥品研發(fā)的進程，研究用樣品的需要量不斷增大，處方工藝基本確定，工藝在不斷地放大，研究者需對工藝放大的樣品進行相應的藥學研究，包括穩(wěn)定性研究。此時，應對三批擬上市包裝中試或中試以上規(guī)模的樣品進行加速試驗和長期留樣試驗，時間應能保證相應研發(fā)期間樣品的質(zhì)量符合要求。

藥品申請注冊時，應提供三批擬上市包裝中試或中試以上規(guī)模樣品加速試驗和長期留樣試驗資料，加速試驗6個月，長期試驗至少12個月，其結(jié)果為確定藥品的包裝、貯藏條件和藥品的初步有效期提供。

藥品上市后，繼續(xù)對生產(chǎn)規(guī)模的樣品進行長期留樣的穩(wěn)定性試驗，以確定產(chǎn)品的實際有效期。

2 外觀性狀變化的判斷

我們經(jīng)常碰到的情況是外觀性狀發(fā)生了變化，但主藥含量和/或降解產(chǎn)物沒有變化，這表明藥品中的有效成分沒有損失，如果該變化在質(zhì)量標準中外觀性狀規(guī)定的范圍內(nèi)，且不影響產(chǎn)品的質(zhì)量和療效，則應在標簽中注明：“在存儲過程中藥品可能會發(fā)生一些外觀的變化，但這些變化不會影響產(chǎn)品的質(zhì)量和療效”。

如果產(chǎn)品的外觀性狀發(fā)生了變化，且超出了質(zhì)量標準中外觀性狀規(guī)定的限度，例如：顏色由微黃色變?yōu)辄S色，顏色的上限就是黃色，而且可以被確定（盡可能使用比色圖），則應判斷藥品失效。

也就是說，判斷藥品外觀性狀是否發(fā)生變化，主要依據(jù)藥品的質(zhì)量是否發(fā)生變化，以及質(zhì)量標準中外觀性狀的描述和規(guī)定的范圍。

3 理化性質(zhì)變化的判斷

這里所說的理化性質(zhì)是指藥品的物理化學性質(zhì)，通常包括理化常數(shù)、酸堿度（pH值）、脆碎度、崩解時限、融變時限等。

迄今為止，還沒有找到反應動力學與理化性質(zhì)的數(shù)學關(guān)系，故用反應動力學推算藥品理化性質(zhì)的變化是不可能的。目前認為，在加速試驗中沒有變化的測試項目，在長期留樣條件下也不會發(fā)生變化。

另外，為理化性質(zhì)變化確定限度也是一項非常困難的工作，尤其是我們不清楚這些理化性質(zhì)的變化對藥物的生物利用度是否有影響。

綜上，判斷理化性質(zhì)是否發(fā)生變化主要依據(jù)藥品的質(zhì)量是否發(fā)生變化，以及質(zhì)量標準中規(guī)定的限度和藥典通則的相關(guān)規(guī)定。

4 化學性質(zhì)變化的判斷

在大多數(shù)情況下，主藥含量可以根據(jù)加速試驗的結(jié)果用反應動力學的方法推算出來，將主藥含量限度定為在整個有效期內(nèi)不低于標示量的90%目前也被普遍接受，當然，10%的含量變動范圍僅僅適用于主藥降解產(chǎn)物的安全性可以接受的情況。

反應動力學是推算藥品有效期的有力工具。不管進行推算的數(shù)據(jù)來自加速試驗還是長期留樣試驗，都必須根據(jù)C＝f（t）的圖表確定樣品的反應動力學類型（零級，一級，二級……）；然后，根據(jù)不同氣候區(qū)溫度（21℃、31℃和41℃，某些情況下4℃）推算主藥的含量，在由此得出的主藥含量變化的曲線圖上，沿平行X軸方向在主藥含量90%處作一條直線，曲線和直線的交叉處即是不同氣候區(qū)藥品的推算有效期。

如果在溫度和主藥含量間沒有找到相應的數(shù)學關(guān)系，或者藥品性質(zhì)的改變有時間依賴性，則只能對穩(wěn)定性試驗數(shù)據(jù)進行回歸分析確定產(chǎn)品的有效期，而不能推算藥品的有效期。此時，長期留樣試驗的時間和結(jié)果就是決定產(chǎn)品有效期的*依據(jù)。

5 微生物性質(zhì)變化的判斷

對非無菌制劑，應對其中的微生物進行控制。對處方中不含防腐劑的產(chǎn)品，判斷微生物性質(zhì)是否發(fā)生變化主要依據(jù)藥典通則的相關(guān)規(guī)定。對處方中含有防腐劑的產(chǎn)品，則應控制防腐劑的含量，確保其在產(chǎn)品有效期內(nèi)都能發(fā)揮作用；防腐劑的含量變化不受標示量90%的限制。對無菌制劑，應進行容器密封性挑戰(zhàn)試驗，以確保產(chǎn)品在有效期內(nèi)達到無菌要求。但是，微生物性質(zhì)不能從1～2批樣品的研究結(jié)果進行外推，因為微生物的影響因素很多：如活性成分、輔料、生產(chǎn)環(huán)境和包裝等均可影響產(chǎn)品的微生物性質(zhì)，這一點應特別注意。

6 確定藥品有效期時需注意的問題

6.1 有效期適用于該產(chǎn)品，因此，僅依據(jù)一批產(chǎn)品的穩(wěn)定性就做出結(jié)論是不夠的，至少應對三批產(chǎn)品的穩(wěn)定性進行研究，而且包括不同規(guī)模樣品的穩(wěn)定性試驗數(shù)據(jù)。

6.2 在進行穩(wěn)定性試驗數(shù)據(jù)分析時，應對所有可以定量的質(zhì)量指標進行方差分析，以確定不同批次樣品之間是否存在統(tǒng)計學差異，如果沒有統(tǒng)計學差異，則可以得出相應的結(jié)論。對小試、中試和大生產(chǎn)樣品穩(wěn)定性數(shù)據(jù)進行方差分析尤為重要，如果不同規(guī)模樣品的穩(wěn)定性試驗數(shù)據(jù)沒有統(tǒng)計學差異，則可以認為將來生產(chǎn)時不同批次產(chǎn)品的穩(wěn)定性沒有差異，因為相同規(guī)模產(chǎn)品的質(zhì)量差異不會大于不同規(guī)模產(chǎn)品的質(zhì)量差異。

6.3 產(chǎn)品穩(wěn)定性的重要信息主要來自確定處方樣品的加速試驗，根據(jù)反應動力學要求設(shè)計加速試驗，3個月就基本可以預知產(chǎn)品的有效期。根據(jù)長期留樣試驗數(shù)據(jù)預測產(chǎn)品有效期時需與加速試驗推算的結(jié)果進行比較，如果6個月后長期試驗結(jié)果與反應動力學計算的主藥含量變化一致，則需繼續(xù)考察兩種方法的結(jié)果能否在產(chǎn)品的整個有效期內(nèi)一致。

6.4 因不同國家和地區(qū)的氣候條件不同，長期留樣試驗條件的設(shè)定主要依據(jù)藥品注冊國家或地區(qū)的氣候條件，若藥品在上市或者的地域氣候差別較大，其穩(wěn)定性試驗應在盡可能多的國家和地區(qū)進行。因為溫度和濕度的變化將會影響藥品的有效期，有試驗顯示溫度升高2℃，產(chǎn)品的有效期將會縮短20%。

6.5 每個氣候區(qū)產(chǎn)品的有效期是根據(jù)相應的穩(wěn)定性試驗結(jié)果確定的。雖然每個氣候區(qū)的平均熱力學溫度在設(shè)定時已經(jīng)將該氣候區(qū)一年中可能存在的溫度波動考慮在內(nèi)，但因一些產(chǎn)品對短時間內(nèi)較高的溫度敏感，因此對這類產(chǎn)品要求明確存儲溫度的上限。

下面是美國FDA頒布的標準，可在確定藥品有效期貯藏條件時參考：必須在＋25℃以下保存；必須在＋20℃以下保存；必須在＋8℃以下保存；必須在＋8℃以上保存；必須在干燥處保存；必須避光保存。特殊情況下也會使用以下標準：必須在＋30℃以下保存；必須在＋15℃以下保存。

6.6 在改變處方和生產(chǎn)工藝時，常常無法獲得2～3批樣品的穩(wěn)定性試驗數(shù)據(jù)，此時研究者應設(shè)法證明處方工藝改變前后產(chǎn)品的穩(wěn)定性沒有差異，則可以借鑒處方工藝改變前的穩(wěn)定性試驗數(shù)據(jù)。如果處方工藝的改變可能會對產(chǎn)品的有效期產(chǎn)生影響，則應對多批樣品進行穩(wěn)定性研究，獲取較完整的穩(wěn)定性信息，以推算產(chǎn)品的有效期。

6.7 穩(wěn)定性試驗測試批次樣品未采用zui終產(chǎn)品的包裝，研究者可在現(xiàn)有包裝條件下穩(wěn)定性試驗結(jié)果的基礎(chǔ)上，結(jié)合外在氣候條件可能產(chǎn)生的影響和zui終產(chǎn)品包裝的特性，推斷出產(chǎn)品的有效期。

但是，無論是改變處方工藝或是測試批次樣品未采用zui終產(chǎn)品包裝，研究者均應對改變處方工藝后樣品和采用包裝樣品進行長期留樣的穩(wěn)定性試驗，以確定產(chǎn)品的實際有效期。

以上就新藥研發(fā)過程中不同研發(fā)階段不同規(guī)模樣品進行穩(wěn)定性試驗的目的和意義，以及不同規(guī)模樣品穩(wěn)定性試驗結(jié)果對確定或推算產(chǎn)品有效期的價值進行了闡述，僅代表個人觀點，目的是與業(yè)內(nèi)人士探討新藥穩(wěn)定性試驗結(jié)果分析和評價的思路，以及在現(xiàn)有注冊申報情況下對有限的穩(wěn)定性試驗數(shù)據(jù)進行合理的分析，預測藥品的有效期，為后續(xù)階段的研發(fā)工作提供藥品穩(wěn)定期限的。

但是，根據(jù)穩(wěn)定性試驗數(shù)據(jù)，采用反應動力學方法推算產(chǎn)品的有效期，通常為藥品注冊申報時有效期的確定提供參考；通過對樣品穩(wěn)定性試驗數(shù)據(jù)進行分析，推算產(chǎn)品的穩(wěn)定期限，其結(jié)果只是預測值，并不代表產(chǎn)品實際的有效期，研究者仍需對上市產(chǎn)品繼續(xù)進行長期留樣的穩(wěn)定性研究，以驗證并確定產(chǎn)品實際的有效期。